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实验两对半的检测ppt课件

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实验两对半的检测ppt课件

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这是实验两对半的检测ppt课件下载,主要介绍了ELISA的概念;ELISA技术特点;ELISA技术的应用;实验目的;为什么不检测核心抗原;双抗原(体)夹心法测抗体;竞争抑制法测抗体;实验操作,欢迎点击下载。

ELISA检测“乙肝二对半” (Enzyme linked immunosorbent Assay ELISA) ELISA的概念 酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) 酶联:抗原或抗体的酶标记。 免疫:以抗原抗体特异性反应为基础。 吸附:抗原或抗体包被于固相载体表面。 在固相载体表面实现抗原抗体的反应,通过酶标记的手段,酶催化底 物形成水解、氧化或还原反应,形成有色物质,其颜色的深浅与标本中的 抗原或抗体的量直接相关。 ELISA技术特点 具有良好的灵敏度和特异性,能满足临床需要,应用广泛。 操作简单、无需昂贵的仪器投入,价格便宜。 对环境几乎没有污染。 ELISA技术的应用 检测抗原的方法: 双抗体夹心法 竞争法 检测抗体的方法: 双抗原夹心法 间接法 竞争法 捕获法 实验目的 掌握ELISA法检测“乙肝二对半” 的原理、操作步骤及注意事项。 掌握检测“乙肝二对半”的临床意义。 什么是“乙肝二对半”? “乙肝两对半”是指:表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb)、e抗原( HBeAg )、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb) HBsAg本身不具有传染性,只具有抗原性 保护性抗体: HBsAb 传染性指标: HBeAg , HBcAg HBeAb, HBcAb不是保护性抗体,而是反映曾被HBV感染的重要指标。 为什么不检测核心抗原(HBcAg) HBcAg主要位于病毒颗粒中,只有少数游离。 机体免疫系统对HBcAg很敏感,易产生高滴度的HBcAb,与HBcAg 形成免疫复合物。 血清中, HBcAg可丢失部分氨基酸。 “乙肝二对半”的检测原理 HBsAg:双抗体夹心法 HBsAb:双抗原夹心法 HBeAg:双抗体夹心法 HBeAb:中和竞争法(血清中的e抗体与固相e抗体竞争结合e抗原) HBcAb:竞争抑制法 双抗原(体)夹心法测抗体(原) 竞争抑制法测抗体 中和竞争法测抗体 试剂盒组成 包被反应板:固相的抗原或抗体 酶结合物:酶标记的抗原或抗体 显色剂:分A、B二瓶 终止液 对照:阳性对照,阴性对照 浓缩洗涤液 中和试剂(只有检测HBeAb的试剂盒才有) 实验准备 配制洗涤液:用蒸馏水按1:20稀释浓缩洗涤液。 为节省试验时间,除检测核心抗体(HBcAb)组外,其余组可在加样后的温育时间中才配制洗涤液。 实验操作 1、加样:第一、二孔为阴、阳对照孔,分别加入阴、阳对照50ul。其余各孔为样品孔,各加入待测标本50ul(检测HBcAb 时,待测标本需用稀释后的洗涤液做1:30稀释)。 2、加中和试剂(只有检测HBeAb时才需要):每孔50ul 3、加酶结合物:每孔50ul 4、温育:封板→充分混匀后置37°C水浴30分钟 5、洗涤:弃去反应条孔内液体,用洗涤液注満每孔,放置或振荡1分钟,弃去拍干→反复5次(注意:最后一次一定要拍干) 6、显色:每孔先加显色剂A 50ul,再加显色剂B 50ul,混匀后置37°C水浴10分钟 7、中止显色:每孔加入中止液50ul 8、判断结果: ①目测法: ②比色法:波长450nm读取各孔OD值 HBsAg, HBsAb, HBeAg 样品OD值/阴性对照OD值≥2.1 HBeAb , HBcAb 阴性对照OD值/样品OD值≥2.1 (建议双波长比色(450/630nm);临界值的确定请参考实验指导,不同的试剂盒和检测原理,临界值的设定均不同) ELISA的注意事项 标本:内源性(RF、补体、嗜异性抗体等) 外源性因素(溶血、细菌污染、保存不当、凝集不全、防腐剂NaN3等)(P229) 试剂:试剂质量、批号、是否失效(冰箱温度)、平衡(37度°C30分钟)、摇匀 加样:加样准确、不可太快,避免加在上部和产生气泡。 温育:温度(定期观察与登记)、时间、湿度、封片(不可重复用) 洗板:洗涤液用蒸馏水或去离子水现配、防止洗板机堵塞、洗完要拍板。 显色:加试剂时不可重复加和漏加,或加在两孔之间,不要产生气泡,及时终止。 比色:建议用双波长(可排除标本浓度、干扰色、电路干扰、板底部划痕的影响)。 结果判定:反应终止后10分钟内 质量控制:内对照、室内质控、室间质评等(全程质控意识) 表面抗原阳性结果、灰区标本、矛盾结果或少见模式均须复查 生物安全:试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。 常见的检测模式(临床意义2) 思考题 sAg检测时,有哪些因素可能导致阴性对照孔也出现颜色? 为什么建议用双波长比色。

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《实验两对半的检测ppt课件》是由用户huangyixuan于2020-09-15上传,属于科学课件PPT。

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