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第六章---电泳技术与仪器ppt

  • 素材大小:15.43 MB
  • 素材授权:免费下载
  • 更新时间:2017-11-21
  • 素材类别:仪器设备PPT
  • 素材格式:.ppt
  • 关键提要:第六章---电泳技术与仪器,仪器
  • 素材版本:PowerPoint2003及以上版本(.ppt)
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这是第六章---电泳技术与仪器ppt,包括了电泳技术的基本原理和分类,常用电泳分析方法,电泳仪的基本结构,电泳技术在临床检验中的应用等内容,欢迎点击下载。

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第六章---电泳技术与仪器ppt

PPT内容

第六章   电泳技术与仪器
郑  芳
重点提示
目  录
发展历程
1809年,俄国科学家列伊斯,发现电泳现象。
1937年瑞典科学家Tiselius建立了界面电泳技术,证明了血清是由白蛋白、α1、α2、β和γ蛋白组成,获得1948年诺贝尔化学奖。
1950年后,区带电泳从发展到成熟。
1980年以来,毛细管电泳逐渐受到重视。
第一节  电泳技术的基本原理和分类
一、基本原理
二、影响因素
电渗作用:
三、分类
支持介质电泳
滤纸电泳
醋酸纤维素薄膜电泳
凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳
毛细管电泳
第二节  常用电泳分析方法
电泳检测的一般步骤
①点样
②电泳
③染色
使用不同的染料或者底物,检测不同类型的蛋白:
血清蛋白、脂蛋白、各种酶类、血红蛋白。
④结果分析
一、醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白
二、琼脂糖凝胶电泳
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳
(二)不连续PAGE的分离原理:浓缩效应
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳
二、梯度凝胶电泳---增加分子筛效应
随着泳动距离增加而丙烯酰胺浓度也逐渐增加的梯度聚丙烯酰胺凝胶,目前已广泛用来代替单一浓度的凝胶。浓度梯度胶随浓度增加而孔径逐渐变小,这将对蛋白质组成的分析更为细致,同时能获得更清晰的蛋白质区带。
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。
三、等电聚焦电泳—电荷效应
 1.等电聚焦电泳过程  一种利用有pH值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。
    在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液(两性载体电解质)中进行分离,每一种被
分离的两性物质都移向与它的等
电点相一致的pH位置,在那里不
再移动(称为聚焦)。
等电聚焦电泳的特点
     ①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度;②由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择;⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。
四、双向凝胶电泳(二维电泳)
    第一向采用等电聚焦  根据复杂的蛋白质成分中
各个蛋白质的PI的不同,将蛋白质进行分离。
    第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶
电泳 (SDS-PAGE)就是按蛋
白质分子量的大小使其在垂直
方向进行分离。其结果不再是
条带状,而是呈现为斑点状。
第二节 常用电泳方法
毛细管电泳的分离模式
(一)毛细管区带电泳
      它是通过在充满电解质溶液的毛细管中,不同质荷比大小的组分,在电场的作用下,依迁移速度的不同而进行分离。
  根据组分的迁移时间进行                                  定性,根据电泳峰的峰面                               积或峰高进行定量分析。
(二)毛细管凝胶电泳
      毛细管凝胶电泳(CGE) 常用聚丙烯酰胺在毛细管内交联制成凝胶柱,依据分离支撑物的分离作用不同,CGE又分为非变性CGE和变性CGE,前者以分子筛、电荷/质量比的作用进行分离;后者则以质量、分子筛的作用进行分离。
      适用于分离、测定肽类、蛋白质、DNA类物质的分离。
(三)毛细管等电聚焦电泳
      不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上,不作迁移而彼此分离,这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程,具有极高的分辨率,通常可
以分离等电点差异小于 0.01
pH单位的两种蛋白质,例如
肽类、蛋白质的分离。
(四)毛细管胶束电动色谱(MECC)
      MECC系统中存在两个相:流动的水相和起到固定相作用的胶束相。
      在含有胶束的流动相中,溶质在“水相”和“胶束相”(准固定相)之间进行分配,即使是中性溶质,因其本身疏水性不同,在二者之间的分配也会有差异,疏水性强的溶质在“胶束相”中停留时间长,迁移速度就慢。反之,亲水性强的溶质迁移速度就快,最终中性溶质将依其疏水性不同而得以分离。
  毛细管电泳
(五)毛细管电色谱
        它包含了电泳和色谱两种机制,是在毛细管中填充 或在毛细管壁
   上键合(或涂壁)固
   定相,从而构成毛细
   管色谱柱,依靠电渗
   流推动流动相,携带
   样品迁移,根据样品
   分子的质荷比、分子
   尺寸及分配系数的差
   别而分离。
(六)毛细管等速电泳
      毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质,然后进样,随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。
(七)毛细管电泳芯片
      毛细管电泳芯片是在常规毛细管电泳的原理和技术基础上,利用微加工技术在平方厘米级大小的芯片上加工出各种微细结构,如通道和其它功能单元,通过不同的通道、反应器、检测单元等的设计和布局,实现样品的进样、反应、分离和检测,是一种多功能化的快速、高效和低耗的微型实验装置。
微流控分析芯片
微流控分析芯片目的是通过化学分析设备的微型化与集成化,最大限度地把分析实验室的功能转移到便携的芯片中。
微流控分析芯片通过微机电加工技术把整个实验室的功能,包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在几平方厘米的微流控芯片上,且可多次使用,因而极大地减少了样品和分析试剂的用量,降低了分析的成本,加快了分析的速度,具有广泛的适用性 。
第三节  电泳仪的基本结构
一、常用电泳仪的基本结构
     常用电泳仪的基本结构及技术指标
一、常用电泳设备的基本结构
   (一)电源
   (二)电泳槽
   (三)附加装置
二、毛细管电泳仪的基本结构
二、毛细管电泳仪的基本结构
二、毛细管电泳仪的基本结构
第四节  电泳技术在临床检验中的应用
电泳技术在临床检验中的应用
三、血红蛋白电泳
一、血清蛋白电泳
异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征
一、血清蛋白电泳
二、尿蛋白电泳
二、尿蛋白电泳
五、免疫固定电泳
六、同工酶电泳
乳酸脱氢酶同工酶(LDH)
每种LD同功酶都是由4个亚单位(肽链)组成的四聚物 这些亚单位中, 有两类分别专属M(肌肉)和H(心脏)。
 H4   = LD1
 H3M  = LD2
 H2M2 = LD3
 HM3  = LD4
 M4   = LD5
六、同工酶电泳
六、同工酶电泳
检测方法--琼脂糖电泳法
             原理:以琼脂糖胶作为介质,LDH可分离出五种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢, 将迁移最快的命名为 LDH1, 依次为 LDH2, LDH3, LDH4和LDH5,最后显色,扫描确定其百分率。
参考值
LDH1  28.4 ± 5.3%       LDH2 41.0 ± 5.0%
LDH3  19.0 ± 4.0%       LDH4 6.6 ± 3.5%
LDH5  4.6 ± 3.0%
七、脑脊液蛋白电泳
1 : 脊髓炎 (0.91)
2 : 多发性硬化症 (2.69)
3 : 由癌症引发的脑炎 (0.70)
4 : 多发性硬化症 (0.63)
5 : 多发性硬化症 (3.60)
6 : 多发性硬化症 (0.74)
八、脂蛋白电泳
 

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